interactúa con NBS1 para reforzar la restauración de la rotura de la doble cadena de ADN

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BCAS2, una proteína enriquecida en los cánceres de próstata superiores, interactúa con NBS1 para reforzar la restauración de la rotura de la doble cadena del ADN

Antecedentes: La secuencia amplificada 2 del cáncer de mama (BCAS2) desempeña un papel importante en el empalme del pre-ARNm y en la transcripción del receptor de andrógenos. Análisis anteriores han demostrado que BCAS2 está presente en las roturas de doble cadena (DSB); debido a esta realidad, nuestro objetivo es caracterizar su mecanismo y lugar en el cáncer de próstata (PCa).

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Métodos: El Western blotting y la microscopía de inmunofluorescencia se han utilizado para ensayar el papel de BCAS2 a través de las DSBs de las células de PCa y la apoptosis en Drosophila, respectivamente. El efecto de la dosificación de BCAS2 en el cambio de extremos no homólogos (NHEJ) y la recombinación homóloga (HR) se ha ensayado mediante un ensayo de unión precisa de extremos y citometría de transferencia, respectivamente. Glutatión-S-transferasa pulldown y ensayos de co-inmunoprecipitación se han utilizado para buscar si es o no y la forma en que BCAS2 interactúa con NBS1. La expresión de BCAS2 y de proteínas totalmente diferentes en el PCa humano se determinó mediante inmunohistoquímica.

Resultados: BCAS2 ayudó a restaurar los DSBs inducidos por la radiación con éxito en cada una de las células de PCa humano y Drosophila. BCAS2 mejoró cada NHEJ y HR, muy probablemente mediante la interacción con NBS1, que implicó el N-terminal de BCAS2 con tanto éxito como cada N- y C-terminal de NBS1. La sobreexpresión de BCAS2 se asoció significativamente a mayores grados de Gleason y de patología y a una menor supervivencia en víctimas de PCa.

Conclusión: BCAS2 promueve dos vías de restauración de DSB al interactuar con NBS1, y podría afectar a la mejora del PCa.

 

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Secuenciación y caracterización del genoma completo del ADN mitocondrial de Trigonopoma pauciperforatum (Cypriniformes: Cyprinidae: Danioninae) con consideración filogenética
El Trigonopoma pauciperforatum o rasbora de rayas rojas es un ciprínido típicamente corriente en marismas y zonas pantanosas con aguas ligeramente ácidas teñidas de tanino en todo el trópico. En este análisis, la secuencia completa del mitogenoma del pauciperforatum se amplificó primero en dos partes utilizando dos pares de cebadores superpuestos, tras lo cual se secuenció.
El tamaño del mitogenoma es de 16.707 pb, y abarca 22 genes de ARN de cambio, 13 genes codificadores de proteínas, dos genes de ARN ribosómico y un espacio de administración putativo. Se ha detectado una organización génica similar entre esta especie y otros miembros de la familia totalmente diferentes.
La cadena pesada alberga 28 genes, mientras que la cadena solar posee los 9 genes restantes. La mayoría de los genes que codifican proteínas utilizan ATG como codón de inicio, a diferencia del gen COI que utiliza GTG en su lugar. La secuencia asociada terminal (TAS), el bloque de secuencia central conservado (CSB-F, CSB-D y CSB-E) junto con el bloque de secuencia variable (CSB-1, CSB-2 y CSB-3) se conservan en todo el espacio de administración.
El árbol filogenético de máxima probabilidad reveló la divergencia de pauciperforatum desde el espacio basal del clado principal, lugar en el que sus relaciones evolutivas con Boraras maculatus, Rasbora cephalotaenia y R. daniconius están mal resueltas, como instan los bajos valores de bootstrap.
Este trabajo contribuye a enriquecer los recursos genéticos útiles para la conservación de los pantanos de turba y a realizar comparaciones exhaustivas a través de diferentes investigaciones filogenéticas realizadas sobre el género Rasbora.

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La reconstrucción de fragmentos de ADN de doble cadena en un diploma de molécula única revela patrones de degradación en muestras históricas

Las intensas manipulaciones que se realizan durante la preparación de las muestras de ADN para su secuenciación han hecho que hasta ahora no sea posible averiguar la construcción exacta de los fragmentos de ADN de doble cadena que se secuencian, como resultado de la presencia de extremos romos, salientes de una sola cadena o roturas de una sola cadena.

Aquí describimos MatchSeq, un método que combina la preparación de bibliotecas de ADN monocatenario a partir de muestras de ADN diluidas con la comparación computacional de secuencias, lo que permite reconstruir fragmentos de ADN bicatenario en un diploma de una sola molécula.

El equipo de MatchSeq para el ADN de Neanderthal, un suministro realmente superior de ADN degradado, revela que los salientes de 1 o 2 nt y los extremos romos dominan los extremos de las moléculas de ADN históricas y que existen brechas temporales, que podrían ser introducidas predominantemente por la escasez de purinas específicas de la persona.

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Además, actualmente la desaminación de citosina a uracilo se produce en todos los contextos de cadena simple y doble cerca de los extremos de las moléculas, y que las partes de cadena simple de los fragmentos de ADN están enriquecidas en pirimidinas. MatchSeq proporciona una determinación sin precedentes para interrogar a los edificios de ADN fragmentado de doble cadena y puede muy bien ser utilizado para el ADN fragmentado de doble cadena aislado de cualquier suministro natural. La táctica se basa en estrategias de laboratorio bien establecidas y puede incorporarse simplemente en el período de información rutinaria.

La reconstrucción de fragmentos de ADN de doble cadena a partir de la información de la secuencia de una sola cadena revelada de antemano confirma esta amenaza, lo que permite una caracterización completa adicional de las propiedades bioquímicas no sólo del ADN histórico, sino también del ADN libre de células del plasma sanguíneo humano, un marcador clínicamente asociado para la evaluación y el seguimiento de la enfermedad.

Fabricación de un anticuerpo policlonal frente a la nucleósido hidrolasa preferente a la inosina-uridina de Acanthamoeba castellanii y su incorporación al análisis de la queratitis por Acanthamoeba

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La queratitis por Acanthamoeba (AK) es una enfermedad poco común, pero su prevalencia en todo el mundo sigue aumentando, principalmente debido a la elevada utilización de lentes de contacto. Dado que los signos de la fase inicial de la QA se parecen mucho a los de otras infecciones de la córnea, el análisis correcto es problemático, lo que suele provocar un retraso en el tratamiento y la exacerbación de la enfermedad, lo que puede dar lugar a un deterioro permanente de la visión. En consecuencia, la creación de una metodología de diagnóstico rápido específico de Acanthamoeba es muy deseada.

En el presente examen, se desarrolló una metodología rápida y diferencial para el análisis de la QA utilizando las proteínas secretoras derivadas de la Acanthamoeba patógena. Entre las numerosas y enormes porciones de proteínas secretadas por la Acanthamoeba patógena, se obtuvo un cuerpo de estudio abierto del gen de la inosina-uridina preferente nucleósido hidrolasa (IPNH). Después de expresar y purificar la proteína IPNH utilizando el sistema de vectores pGEX 4T-Three, se inmunizó a los ratones con las proteínas purificadas para obtener anticuerpos policlonales.

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